ELISA试剂盒操作时到底需要注意哪些细节？

1. 首先我们在做ELISA试剂盒实验前，必须先搞清楚它的原理。ELISA试剂盒分几种类型。一般可将ELISA分为以下几种类型，实验君首先需要根据自己的待检物来确定试剂盒类型。

1) 双抗体夹心法：针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相捕获抗体和酶标检测抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原如血浆中的细胞因子，不适用于测定半抗原及小分子单价抗原。同理，也有双抗原夹心法测抗体。

2) 直接法：将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一抗，即可测定抗原总量。此法操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。

3) 间接法：间接法是检测抗体常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）来检测与固相抗原结合的待检抗体。

4) 竞争法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。

2. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

3. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

4. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

5. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

6. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

7. 在储存和温育时避免强光直接照射。

8. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

9. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

10. 不能使用过期产品。

11. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

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原创作者：上海臻科生物科技有限公司